Western blot ECL化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒使用說明書
產(chǎn)品簡介
Western blot ECL化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒可用于檢測辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的蛋白或核酸底物。 本產(chǎn)品采用全新的發(fā)光增強(qiáng)劑,并對各種成分進(jìn)行優(yōu)化,使之具有以下幾個(gè)方面的優(yōu)點(diǎn):1、靈敏度高, 微弱的信號也能檢測,所以允許使用更高的抗體稀釋倍數(shù),(1:
4000-1: 10000),極其節(jié)省抗體; 2、 有效降低發(fā)光試劑造成的非特異發(fā)光和背景發(fā)光,從
而避免發(fā)光試劑造成"非特異條帶”或"背景條帶”; 3、 不破壞膜上蛋白,可在曝光后,經(jīng)洗滌,對多種蛋白進(jìn)行雜交; 4、發(fā)光更加穩(wěn)定可靠,從而避免“發(fā)光淬滅"以及人為干擾。
試劑盒組分
產(chǎn)品編號 |
試劑 |
濃度 |
試劑量 |
保存條件 |
B00701-125 |
溶液A |
2x |
100ml/250ml/500ml |
4°C密封避光 保存有效期一 年以上。 |
溶液B |
2x |
100ml/250ml/500ml |
實(shí)驗(yàn)步驟
1、
按常規(guī)Western blot操作,電泳、轉(zhuǎn)膜、一抗 孵育、二抗孵育后,進(jìn)行**一次洗滌時(shí),根據(jù)膜的大小,新鮮配制發(fā)光工作液。將溶液A、溶液B按1:1 比率混合,制成發(fā)光工作液(每1cm2膜需要0.125ml 發(fā)光工作液);
2、 用鑷子取出膜,并搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜完全干燥。膜的蛋白面朝上,將配制的發(fā)光檢測液均勻覆蓋到蛋白膜上,室溫孵育1分鐘左右;
3、 用鑷子將膜夾起5-10秒,并將膜的下緣與濾
紙輕輕接觸以除去膜上多余的發(fā)光液,迅速將膜完全 包裹于潔凈保鮮膜內(nèi),去除氣泡和褶皺,蛋白面朝上 固定于X片暗盒;
4、 在暗室中取一張X片置于包裹的膜上,合上暗盒,曝光30秒至1分鐘。立即顯影定影,根據(jù)其曝光強(qiáng)度,縮短或延長下一張X片的曝光時(shí)間(對微弱信號,曝光時(shí)間可延長至數(shù)小時(shí));
5、 對同一張膜進(jìn)行多次蛋白雜交:用PBST或 TBST洗滌掉發(fā)光液(10minx3次),然后從開始一
抗雜交即可。
注意事項(xiàng)
1、 避光條件下,配制好的化學(xué)發(fā)光工作液在室溫下可穩(wěn)定8小時(shí)。但不宜暴露于強(qiáng)光下時(shí)間過久,請 避光保存。正常實(shí)驗(yàn)室燈光短時(shí)間照射不影響工作液的使用;
2、 長時(shí)間曝光或蛋白質(zhì)過量,將加深背景并使條帶強(qiáng)弱變化失去線性關(guān)系。曝光不足則條帶模糊;
3、 為了得到**的曝光效果,優(yōu)化一抗、二抗的稀釋比例;
4、 整個(gè)免疫印跡實(shí)驗(yàn)過程請確保印跡膜始終處于濕潤狀態(tài),避免干燥;
5、 避免使用NaN3回收HRP偶聯(lián)的抗體,因?yàn)镹aN3能**HRP的活性;
6、 NaN3能**HRP活性,回收二抗時(shí)應(yīng)避免使用NaN3,如必需使用勿超過0.01%;
7、 在封閉緩沖液及所有抗體稀釋液中加入高質(zhì)量的吐溫-20 (終濃度為0.05% ),以減少非特異性 結(jié)合;
8、 某些市售的保鮮膜會(huì)淬滅熒光,應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜。
| 无码久久人体做爰大胆 | 91人妻人人澡人人爽人人精吕 | 久久国产乱子伦精品一区二区 | 特级做a爰片毛片大巴一 | 四川BBB搡BBB爽爽视频 | 小辣椒成人aV一区二区 | 少妇精品一品二品三品在线观看 | 免费污网站在线观看 | 精品国产成人在线观看 | 十八禁片网站在线免费观看 | 波多野精品一区二区三区色情 | 国内寡亲子伦一区二区 | 日韩人妻中文字幕 | 日本三级片在线观看 | 欧美天堂成人成人A片在 | 无码AV一区二区三区黄台国产 | 午夜福利老湿一级无码毛片 | 国产综合精品久久久久成人AV | 黄色免费在线网站 | 久久,,,,,。。。。精品 | 国产91丝袜在线观看 | 污网站高清无码在线观看 | 国产精品熟女一区二区 | 在线观看 禁无码精品 | 中文字幕无码人妻少妇免费 | 少妇高潮一区二区三区99刮毛 | 一级片视频网站免费看 | 精品国偷自产国产一区 | 无码精品视频在线观看 | 丰满少妇被猛烈进入无码蜜桃 | 中国少妇XXXⅩ性A片 | 亚洲人成色777777精品音频 | 一级久久久久毛毛A片 | 欧美人猛交日本人XXX | 国产伦精品一区二区三区视频黑人 | 女人被狂躁C到高潮视频 | 精品人妻一区二区三区日产 | 高清无码十八 成人在线免费观看 | 91嫖妓站街按摩店老熟女 | 老熟女亂伦一区二区三区在线 |